'''Isabella af Portugal''' (født [[24. oktober]] [[1503]], [[Lissabon]], –død [[1. maj]] [[1539]], [[Toledo]]) var en [[Portugal|portugisisk]] [[infantinde]], der var [[Tysk-romerske rige|Tysk-romersk]] [[kejserinde]] og [[dronning]] af [[Kongeriget Spanien|Spanien]] fra [[1526]] til [[1539]]. Hun var datter af Kong [[Emanuel 1. af Portugal]] i hans andet ægteskab med [[Maria af Aragonien og Kastilien]] og blev gift med den [[Tysk-romerske rige|tysk-romersk]]e [[kejser]] [[Karl 5. (Tysk-romerske rige)|Karl 5.]] i [[1526]].